安捷倫 流式細(xì)胞儀 NovoCyte D3000640 。需要解決640通道cv較大,QC不通過(guò)問(wèn)題。圖片分析,儀器后方有滲液結(jié)晶,估計(jì)內(nèi)部有配件損壞,最好遠(yuǎn)程打開后蓋板拍照。需要與用戶確認(rèn)更換過(guò)液路系統(tǒng)過(guò)濾器沒(méi)有。。需要上門維護(hù)
流動(dòng)室與液路穩(wěn)定性
· 執(zhí)行 Prime 操作 排除流動(dòng)室氣泡,確認(rèn)鞘液流量正常(廢液流速約 90ml/5分鐘)。
· 檢查 噴嘴密封圈 是否老化漏氣或堵塞(可用 10% 次氯酸鈉沖洗堵孔)。
· 更換 鞘液過(guò)濾器,避免顆粒物干擾鞘流穩(wěn)定性。
光路校準(zhǔn)與檢測(cè)器優(yōu)化
· 清潔 640nm 激光窗口及對(duì)應(yīng)濾光片,排除塵埃污染導(dǎo)致信號(hào)散射異常。
· 通過(guò) NovoExpress 軟件 校準(zhǔn) PMT 電壓,確保增益設(shè)置適配熒光信號(hào)范圍(動(dòng)態(tài)范圍需覆蓋弱/強(qiáng)信號(hào))。
樣本制備優(yōu)化
· 控制細(xì)胞濃度在 1×10?–1×10?個(gè)/mL,減少聚集或流速不均導(dǎo)致的信號(hào)波動(dòng)。
· 對(duì)樣本進(jìn)行過(guò)濾(如 40μm 濾網(wǎng))或輕柔吹打,避免細(xì)胞團(tuán)塊堵塞進(jìn)樣針。
抗體與染料問(wèn)題
· 確認(rèn)熒光抗體 儲(chǔ)存條件正確(避光冷藏,避免沉淀析出),稀釋比例適配目標(biāo)抗原表達(dá)水平。
· 檢查 補(bǔ)償矩陣 是否誤覆蓋 640nm 通道,建議重新運(yùn)行單色對(duì)照調(diào)整補(bǔ)償。
調(diào)整項(xiàng) | 操作建議 |
信號(hào)采集速率 | 降低樣本流速至 中速(如≤30μL/min),提升信號(hào)穩(wěn)定性 |
觸發(fā)閾值 | 設(shè)置 FSC/SSC 觸發(fā)閾值 排除碎片干擾,減少背景信號(hào)對(duì)CV影響 |
PMT動(dòng)態(tài)范圍 | 啟用 寬動(dòng)態(tài)檢測(cè)模式(動(dòng)態(tài)范圍≥7.2個(gè)數(shù)量級(jí)),避免信號(hào)飽和或丟失 |
周期性校準(zhǔn)
· 每日開機(jī)后運(yùn)行 CST(系統(tǒng)適用性測(cè)試)微球,監(jiān)測(cè)640通道CV值趨勢(shì)。
· 每年由工程師進(jìn)行 光路校準(zhǔn)及壓力傳感器校驗(yàn) 以維持基線穩(wěn)定性。
耗材更換
· 每季度更換 鞘液管路密封圈 和 過(guò)濾器,防止漏液或壓力波動(dòng)。
· 使用原廠 SCS系列校準(zhǔn)品 驗(yàn)證絕對(duì)計(jì)數(shù)精度。
· 若CV值持續(xù)異常,嘗試 短時(shí)間(30分鐘)高速鞘液沖洗 清除管路殘留